Cour 20 les biotechnologies
Dépistage et médecine légale
Le dépstage est un aspec de la biotechnologie.
Pour faire le dépistage, il faut deux grandes étapes :
- Extration de l’ADN
- Amplification par PCR
PCR
Pcr : Polymerase chain réaction
C’est faire la réplication de l’ADN dans une éprouvette
Ont vas séparer le double brin d’ADN en chaufant la solution (dénaturation).
Les liason hydrogene qui tienent les brin ensemble vont se défaire.
Il faut metre dans l’éprouvette :
- ADN a répliquer
- ADN polymérase
- Nucléotides
- Amorces (ADN monocaténaire)
ADN monocaténaire
C’est de un monobrin d’ADN qui s’atache a un emplacement spécifique sur l’ADN. Elle sont complémentaire a la région au alentour de celle que l’ont veux amplifier
Ont met une amorce de chaque côter du gène, de 3’→5’ et de 5’ → 3’ (sur les deux brin d’ADN séparer)
Les amorces sont spécifiques (permet d’amplifier uniquement la portion d’ADN désirée)
Les amorces sont en paire (ADN pol répliquer de 5’→3’)
Pour la précedure :
- Ont met tout les ingrediant dans des petit tubes
- Dénaturation : Ont monte la température a 95 degres, sa sépare l’ADN en deux
- Hybriation : Les amorces s’atache de chaque côter de notre gène désirer. Temperature plus base.
- Élongation : L’ADN polymerase s’atachent sur l’armorce et agrandit l’extremiter 3’ de l’amorce. Ca duplique l’ADN. A 72 degres celcius.
- C’est une enzyme d’une baterie qui vie a hautre temperature
- Ont repete tout ceci des dizaine de fois. Cela amplfier énormément la quantiter d’ADN. Ont amplifie uniquement la séquence qui nous interesent. Chaque cycle prend environ 30 seconde
Le rendement est exponentiel Tres faible uanité d’ADN de départ Spécifiuqe pour une séquence choisie
Si le semgent n’est pas présent dans l’ADN analyser, alors ont ne vas dupliquer d’ADN, et il n’y aurat pas de signal.
Si le brin que l’ont cherche est de l’ARN, alors ont utilise la transcriptase inverse des retrovirus pour fabriquer de l’ADN a partir de l’ARN. Ont peut ensuit faire un PCR
Ensuite, pour visualiser l’ADN, ont vas utiliser la rche de l’ADN pour faire propager de l’ADN a travers un gel. Des semgent de differente longeul vont se déplacer a des vitesse differente. Ont peut ensuite utiliser de la fluoresence pour regarde ou sont les segment d’ADN.
Ont sépare donc les segment par poid moleculaire. Rajoute du glycerol pour que l’ADN ne se difusent pas sans l’electrode.
Ont peut ensuite les visualiser a l’aide d’un colorant fluoresant que l’ont atache a l’ADN. Souvnet des molecules qui s’intercale dans l’ADN. C’est toxique.
Le cyber safe est similaire mais est plus safe. Beaucoup moin sensible.
Ont ecite le colorant a l’aide d’une lumiere, et il y a fluoresence.
Pour trouver la longeur des fragment, ont rajoute des marceur de poids moleculaire, qui nous permenent d’avoir une échelle.
Désormias, il est possible de faire du pcr sans faire séparation par gel, mais a cahque cycle. A l’aide de microfluidique.
Dans un gel ont peut couper un gel pour séparer une section spéficique d’ADN.
Séquencage
C’est étaplir la séquence nucléotidique d’une portion d’ADN un d’un génome entier.
Beaucoup de ces technique implique le PCR
En 1997 le génome e-coli a été séquencer. En 2003 le génome humain est séquencer.
Ca permet de détecter certaines maladie. Ca permet de faire le tracage de maladie génétique.
Scene de crime
Dans un scene de crime, ont amplifie pas des gènes, ont amplifier des région de l’ADN qui ne sont pas des gènes.
Il y a des grands nombre de section de l’ADN qui ne sont pas des exon. Uniquement 1.5% du génome sont des exons. Les séquence régulatrice représente environ 20%.
Voir fig. 21.6 pour plus de détail
Adn répétifif sont des segment d’ADN qui se répéte, et qui change de position dans le baguage génétique.
Il y a probablement aussi des vestiges de retrovirus.
Dans une scene de crime, ont amplifie des séquence répétitive sans utiliter aparante. Ces locuste varie souvent entre les personnes. Certaines personne auront psa le même nombre de répetition
Ont vas emplfier les short tandem repeat sequences. Nb. de répetition de 4-5 nucléotide change, c’est du polymorphisme.
Ex : GTCC GTCC GTCC GTCC GTCC
Pour faire ceci, ont fait des amorces qui se mettent de chaque côter d’un locuste avec des copies repetitive. Dependament du nombre de repetion, le fragment repliquer par PCR vas être plus long ou plus court.
Souvent ont vas avoir deux bandes, parce que le gène du père et de la mère ont des longeur differente.
La chance d’avoir le même nombre de répétitio entre deux individus est d’environ 5-20%. C’est pour cela que l’ont ne regarde pas un seul locuste. Ont regarde souvent 13. Ce sont les séquences CODIS
Autres application
OGM